凯氏定氮测定人体尿液的总氮含量
尿总氮是血液除去蛋白的其他含氮物质,主要是蛋白的代谢产物,包括尿素、尿酸、肌酐、肌酸、氨基酸和氨等,另外还有含量很少的所谓未鉴定氮,如谷光甘肽和核甘酸的氮等,它们的分子量小,很易从肾脏排出,尿排泄氮类又受饮食中蛋白质量的影响,也与身体的蛋白质分解和合成代谢平衡有关。
常见的检测方法有:Kjeldahl(凯氏定氮)法、气相色谱法(GC)、紫外可见光谱法、Nessler试剂法、电导法等,下面介绍凯氏定氮法对尿液中的总氮含量进行测定。
一.人尿总氮检测:
正常值:<857mmol/24h(<12g/24h)
混合饮食:714-1285.2mmol/24h(10-18g/24h)
低蛋白饮食:357mmol/24h(5g/24h)
高蛋白饮食:1570-1785mmol/24h(22-25g/24h)。
异常结果:(1)升高:肾功能衰竭、尿路梗阻、心力衰竭、消化道出血、严重脱水、白血病等。(2)降低:严重肝病等。
需要检查的人群:有发热、呕吐、高寒、恶心、容易出血、泌尿功能障碍等症状的人。
二.家畜尿总氮检测:
凯氮的分析结果可以检查日粮中物质代谢的情况。家畜尿中的氮的存在形式和数量与家畜日粮中蛋白质的质和量有密切关系。
实验原理
天然有机物(如蛋白质、核酸及氨基酸等)的含氮量用凯氏定氮法来测定。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时,分解出氮、二氧化碳及水。氮转变出的氨与硫酸化合生成硫酸铵。分解反应进行得很慢,可加入硫酸铜及硫酸钾或硫酸钠促进之,其中硫酸铜为催化剂,硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。
消化完了后,在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液,使硫酸铵分解,放出氨。用水蒸汽蒸馏法,将氨蒸入过量标准无机酸溶液中,然后用标准碱溶液进行滴定,准确测定氨量,从而折算出含氮量。以甘氨酸为例,该过程的化学反应如下:
实验过程
1、样品制备
移取样品1mL,加入消化管。加入混合催化剂(0.3gK2SO4、0.02gCuSO4),加入硫酸2ml。
2、消解
将加完样品和试剂的消化管放置于消解仪上,盖好排废罩,设定消解仪参数如表1所示:
表1消解参数设置
3、测试
消解完成后,待消化管冷却至室温后取下备用。检查定氮仪各试剂是否充足,同时做仪器空白,待仪器空白稳定后,可将消解好的样品上机测试。定氮仪参数设置如表2所示
仪器
VELP凯氏定氮系统分为两部分:消化系统和蒸馏滴定系统。具有自动化程度高、耗材利用率高、准确度高,节能环保、结构紧凑美观等优点。
1. **的蒸汽发生器:常压型
2. **的钛金属冷凝:更高的温度交换效率
3. 聚合材质防溅装置:耐酸和碱腐蚀
4. 多任务软件和**连接:7英寸触摸屏和网络连接
5. 符合21CFR第11部分:UDK159和UDK169完全符合
6. 比色滴定(UDK159-169):VELP集成滴定仪**免维护(AOAC推荐方法)
7. 操作员的*大**:**防护门,样本管放置位置,**把手位置均配备**传感器
